proces hodowli komórek ssaków
Komórki ssaków przechodzą proces ekstrakcji tkanek, kultury pierwotnej i subkultury. Subkulturę można podzielić na hodowlę linii komórkowej i hodowlę linii komórkowej w zależności od warunków. Każdy proces jest krótko opisany w następujący sposób:
Hodowla podstawowa: Po usunięciu tkanki ze zwierzęcia jest ona mielona, traktowana różnymi enzymami (zwykle trypsyną), czynnikami chelatującymi (zwykle EDTA) i metodami mechanicznymi (wielokrotna aspiracja i pipetą), a następnie rozpraszana w poszczególnych komórkach, Hodowana w odpowiednim podłożu, które umożliwia komórkom przetrwanie, wzrost i rozmnażanie. Pierwotna hodowla komórkowa ogólnie odnosi się do hodowli komórkowej w ciągu 10 pasaży po usunięciu komórek ze zwierzęcia.
Po pierwotnej hodowli komórkowej, podziale i rozmnażaniu komórek, hodowla stopniowo wzrasta, wzrost wypełnia przestrzeń hodowli, a następnie kontaktuje się ze sobą, powodując zahamowanie kontaktu, a tempo wzrostu stopniowo zwalnia lub nawet zatrzymuje się. Musi zostać ponownie wysiewany w nowych kolbach hodowlanych dla subkultury.
Passaging (przejście): Komórki pierwotne są wyjmowane z kolby hodowlanej, przygotowuje się zawiesinę komórkową i dzieli na dwie lub więcej kolb hodowlanych do dalszej hodowli, która nazywa się subkulturą.
Linia komórkowa: Linia komórkowa to linia komórkowa po pierwszym przejściu w hodowli pierwotnej. Jeśli czas przeżycia linii komórkowej jest ograniczony, nazywa się ją skończoną linią komórkową. Linia komórkowa, która uzyskuje nieograniczoną zdolność reprodukcyjną i nadal przeżywa, nazywana jest ciągłą linią komórkową lub nieskończoną linią komórkową.
Linia komórkowa: Z biologicznie zidentyfikowanych linii komórkowych populacja komórek utworzona przez izolację pojedynczej komórki, hodowlę lub badanie przesiewowe nazywa się linią komórkową. Populacje komórek o różnych kształtach są następnie izolowane i hodowane z pierwotnej linii komórkowej, tworząc podklany.
Warunki hodowli komórkowej ssaków
Różne komórki ssaków wymagają podstawowych warunków hodowli na każdym etapie
1. Sterylne i nietoksyczne środowisko: aseptyczna obróbka pożywki hodowlanej i całego sprzętu hodowlanego; dodawanie antybiotyków do pożywki hodowlanej, aby zapobiec zanieczyszczeniu podczas procesu hodowli; regularna wymiana pożywki w celu usunięcia metabolitów w celu zapobieżenia uszkodzeniu hodowanych komórek.
2. Odżywianie: Płynne podłoże syntetyczne zawiera cukry, aminokwasy, czynniki wzrostu, wodę, sole nieorganiczne, pierwiastki śladowe itp. Zwykle konieczne jest dodanie naturalnych składników, takich jak osocze i serum
3. Odpowiednia temperatura i wartość pH: Optymalna temperatura dla komórek ludzkich i ssaków wynosi 36±0,5 ° C. Odpowiednia wartość pH wynosi 7,2-7,4.
4. Środowisko gazowe: Środowisko gazowe to na ogół "95% powietrza + 5% dwutlenku węgla" mieszany gaz. Tlen jest gazem niezbędnym do metabolizmu komórkowego, a dwutlenek węgla utrzymuje pH medium.