W przypadku typowych szalek Petriego ze szklanym dnem dostępnych na rynku, zwykle wykonuje się otwór w dnie plastikowej szalki Petriego, a następnie przykleja się do dna szkiełka nakrywkowego lub szkiełka z komórkami o grubości 170-220 μm płytka Petriego z klejem bezcieniowym lub żelem krzemionkowym. Nie całe dno szalki Petriego jest wykonane ze szkła. Obszar odpowiedni do obserwacji znajduje się tylko w obszarze perforacji. Jednak ze względu na hydrofobowość szkła, podczas hodowli komórek komórki nie mogą dobrze przylegać do szkła, a stan wzrostu nie jest dobry, a nawet zjawisko rozwarstwienia komórek występuje podczas obrazowania konfokalnego.
Aby komórki dobrze przylegały, przed użyciem naczyń ze szklanym dnem do hodowli komórkowej należy potwierdzić, że zostały pokryte określonymi odczynnikami białkowymi.
kołdra zrób to sam
Różne hodowle komórkowe wymagają różnych odczynników powlekających. Jednocześnie, ponieważ białko stosowane do powlekania jest produktem biologicznym, czystość produktu i dawkowanie białka powlekania różnych firm są różne. Ten post techniczny jest tylko w celach informacyjnych. Konkretne dozowanie odczynników do powlekania powinno odnosić się do instrukcji używanych marek. . Najlepiej jest przeprowadzić eksperyment gradientowy z odczynnikami, których używasz, aby znaleźć najbardziej odpowiednie stężenie powłoki.
Oto przykład poli-L-lizyny (PLL, sigma, P4832, 100ug/ml):
Powłoka PLL jest odpowiednia dla zdecydowanej większości komórek, zwłaszcza dla hodowli neuronów w układzie centralnym. Konieczne jest, aby zawartość białka (ug/cm2) na jednostkę powierzchni osiągnęła pożądaną ilość podczas stosowania. Zalecana ilość powłoki dla PLL w tym przykładzie wynosi 2 μg/cm2. Konieczne jest obliczenie wymaganej ilości białka w zależności od powierzchni powłoki i objętości powłoki.
Na przykład: szalka Petriego ze szklanym dnem o średnicy 35 mm, powierzchnia wzrostu komórek wynosi 3,5 cm2, powierzchnia powłoki wynosi 4,1 cm2, a objętość roztworu powlekającego wynosi 400 ul, wtedy zalecana dawka wynosi 2 ug/cm2. Następnie potrzeba 8,2 μg PLL w jednym dołku. Jeśli dodaje się tylko 400 μl roztworu PLL, stężenie roztworu PLL wynosi 20,5 μg/ml (około 20 μg/ml). Dlatego roztwór podstawowy należy rozcieńczyć wodą ultraczystą.
Konkretne kroki:
1. Rozcieńczyć roztwór podstawowy PLL w stosunku 1:5 ultraczystą wodą.
2. Dodaj 400 µl rozcieńczenia PLL do każdej płytki Petriego ze szklanym dnem o średnicy 35 mm.
3. Inkubuj przez 1-2 godzin w temperaturze pokojowej i zaaspiruj rozcieńczenie PLL.
4. Ostrożnie przemyć 3 razy 2 ml roztworu PBS lub podłoża bez surowicy i zaaspirować roztwór do płukania.
5. Bezpośrednio dodaj zawiesinę komórek do hodowli.
Ocena metody
Ze względu na różne właściwości różnych białek powlekających, różne białka powlekające są stosowane na różne sposoby. Nowe zanieczyszczenia często powstają w związku z koniecznością pokrywania naczyń ze szklanym dnem. Co więcej, zanieczyszczenie jest często wykrywane po podniesieniu komórek, co nie tylko opóźnia czas, ale także powoduje marnowanie materiałów eksploatacyjnych zestawu. W końcu powlekane odczynniki białkowe i naczynia ze szklanym dnem o zapewnionej jakości są drogie (szklane naczynia o złej jakości mogą przeciekać, ponieważ klej nie jest lepki lub zastosowany klej jest toksyczny dla komórek).
Konfokalne szalki Petriego bez powłoki
Dla dzieci, które chcą zaoszczędzić czas i wysiłek, wygodniejsze jest stosowanie naczyń konfokalnych bez polewy.
Czynniki, które należy wziąć pod uwagę przy wyborze odpowiedniej szalki hodowlanej, to: czy jest ona odpowiednia dla przylegania własnych komórek, czy właściwości optyczne szalki hodowlanej spełniają wymagania konfokalne.
Szalki Petriego, które spełniają wymagania powyższych czynników, nie są ograniczone do szalek ze szklanym dnem z powłoką. Tak naprawdę wszyscy wiedzą, że naczynia plastikowe są tańsze i łatwiej przylegają do komórek niż szkło. Oto przykład naczynia do hodowli konfokalnej z Shanghai Jingan, aby porozmawiać o parametrach, jakie musi mieć danie hodowlane odpowiednie do eksperymentów konfokalnych:
Można zauważyć, że parametry fizyczne naczyń do hodowli konfokalnych, które spełniają wymogi bezpośredniego użycia, są bardzo zbliżone do szkła, ale jednocześnie mają również właściwości hydrofilowe, które mogą sprawić, że większość komórek lepiej przylega; i plastyczność są lepsze niż szkło. Pozwala większości linii komórkowych i komórek pierwotnych bezpośrednio przylegać do ściany i nie jest kruchy, co jest dobrym wyborem.
W powyższej tabeli można również znaleźć najodpowiedniejsze szalki do hodowli konfokalnej dla swojego eksperymentu zgodnie z konkretnymi wymaganiami eksperymentalnymi i parametrami.
Ocena metody
Wybór tego typu szalek Petriego nie wymaga dodatkowego powlekania, co znacznie zmniejsza ryzyko zanieczyszczenia. A ponieważ plastikowe dno jest łatwiejsze w obróbce, klej nie jest potrzebny do przymocowania go do dna szalki Petriego. Wyeliminuj możliwość wycieku lub cytotoksyczności.
