materiały eksploatacyjne pcr
1. Dlaczego materiały zużywalne do PCR są zazwyczaj wykonane z PP?
Niezależnie od tego, czy jest to zwykły PCR, czy ilościowy PCR z fluorescencją w czasie rzeczywistym (qPCR), zwykle jego materiały eksploatacyjne będą miały bezpośredni kontakt z odczynnikami lub próbkami, dlatego w procesie produkcji i przygotowania wymagane są wysokiej jakości materiały i dobre techniki przetwarzania. Ogólne materiały eksploatacyjne są wykonane z polipropylenu (PP). Polipropylen (PP) jest materiałem obojętnym biologicznie, jego powierzchnia nie jest łatwa do przylegania do biomolekuł, ma dobrą odporność chemiczną i tolerancję temperaturową.
2. Jak wybrać probówki/płytki do PCR o różnych objętościach?
Typowe objętości probówek/płytek do PCR:
• Pojedyncza probówka/{{0}}probówka/12-probówka: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,1 ml
• Płytka {{0}}dołkowa: 0,2 ml, 0,1 ml
• Płytka {{0}}dołkowa: 0,02 ml
Specyfikacje probówek/płytek do PCR:
Wybierz odpowiedni produkt zgodnie z określonymi wymaganiami eksperymentalnymi. Objętość większości probówek do PCR może spełniać wymagania reakcji PCR. Specyfikacje pojemności są dostępne dla pojemności standardowej i niskiej. Zasadniczo zaleca się, aby najpierw wybrać rury o małej pojemności. Ponieważ rury/płyty reaktora o małej objętości mają mniejszą przestrzeń nad głową, poprawia się wymiana ciepła i zmniejsza się parowanie. Jednocześnie podczas dodawania próbek należy unikać dodawania zbyt dużej lub zbyt małej próbki. Zbyt duża ilość może prowadzić do zmniejszenia przewodności cieplnej, rozlania i zanieczyszczenia krzyżowego, natomiast zbyt mała może spowodować utratę parowania próbki.
3. Jaka jest różnica między osłoną płaską a osłoną wypukłą pojedynczej probówki lub 8-rzędowej tuby?
Gdy objętość próbki jest mała, preferowane są pojedyncze probówki lub {{0}}probówki. Jednak gdy wymagana objętość reakcji jest duża, przeważają pojedyncze probówki, a objętość może osiągnąć 0,5 ml. Istnieją dwa rodzaje tub pojedynczych i 8-rur z płaską i wypukłą pokrywą, z których każda ma swoje zalety. Płaska nasadka zapewnia precyzyjne dostarczanie sygnału fluorescencyjnego do qPCR; łatwe pisanie po markerach. Wypukła pokrywa styka się z pokrywą instrumentu PCR, aby zmniejszyć deformację probówki spowodowaną ciśnieniem; wpłynie to jednak na transmisję sygnałów fluorescencyjnych i nie może być stosowane w eksperymentach qPCR.
4. Jakie są różnice w scenariuszach użytkowania różnych 96-płytek dołkowych?
96-Płytki z dołkami są ogólnie podzielone na płytki bez osłony, płytki z częściową osłoną i płytki z pełną osłoną.
Płytki bez spódnicy: Kompatybilne z większością termocyklerów lub maszyn qPCR, ale nie nadają się do zastosowań automatycznych. Stabilność nie jest wysoka podczas procesu pipetowania i należy go używać z uchwytem na płytki.
Płytka typu semi-skirt: może być przystosowana do etykietowania lub nanoszenia kodu kreskowego oraz do automatycznej aplikacji i ma dobrą stabilność pipetowania.
Pełna płyta osłonowa: doskonale nadaje się do zautomatyzowanych zastosowań laboratoryjnych, ale nadaje się również do etykiet i kodów kreskowych. Dobra wytrzymałość mechaniczna, odpowiednia do maszyn PCR z wystającymi modułami oraz wysoka stabilność podczas pipetowania.
5. Czy płytka/probówka do PCR jest grubsza i bardziej stabilna?
NIE. Materiały eksploatacyjne do PCR muszą mieć jednakową grubość ścianek, aby zapewnić stałą wymianę ciepła. Ultra cienka ścianka tuby jest o 50 procent cieńsza niż w wersji standardowej, co może dodatkowo zmniejszyć barierę termiczną, co skutkuje szybszą i lepszą reakcją.
6. Dlaczego w przypadku płytek 96-dołkowych lub 384-dołkowych ścięte rogi i etykiety nie są takie same?
Cięcie w rogu: Wybór pozycji cięcia w rogu płytki do PCR zależy od wymagań dostosowanego instrumentu w zakresie łatwego pozycjonowania.
Identyfikacja: Oznaczenia alfanumeryczne na płytkach do PCR pomagają zidentyfikować poszczególne dołki i lokalizacje próbek. Zwykle jest to logo z wypukłym kolorowym numerem lub logo grawerowane. W przypadku niektórych zautomatyzowanych eksperymentów aplikacyjnych płytka reakcyjna z nadrukowanymi znakami będzie lepiej uszczelniona.
7. Niektóre dołki płytki do PCR wystają, a inne są płaskie. Który jest lepszy?
Dobre jest to, co jest odpowiednie. Typowe płytki do PCR mają dwa rodzaje: płaskie krawędzie studzienek i wypukłe krawędzie studzienek. Płytka reakcyjna z płaską krawędzią studzienki, odpowiednia dla większości termocyklerów. Płytka reakcyjna na krawędzi otworu pionowego jest wygodna do uszczelnienia, co może zmniejszyć ryzyko zanieczyszczenia krzyżowego między próbkami.
8. Jak wybrać probówki/płytki do PCR w różnych kolorach?
Do zwykłych reakcji PCR można użyć przezroczystych. W reakcji PCR w czasie rzeczywistym czułość i konsystencja białej probówki są stosunkowo wyższe. Białe ścianki rurki zapobiegają przechodzeniu fluorescencji przez ścianki rurki i załamaniu, zapobiegając w ten sposób przedostawaniu się fluorescencji do modułu grzewczego, absorpcji przez moduł lub niespójnemu odbijaniu. W porównaniu z przezroczystymi probówkami, na górze białych probówek można zbierać silniejsze i bardziej skupione sygnały fluorescencyjne.
