Nasze metody działania, szczegóły i wyjaśnienia teoretyczne staną się wytycznymi dla Twojej operacji, takiej jak umieszczanie roztworów odżywczych i kolb komórkowych; procedury sterylizacji; Aby nauczyć się ich prawidłowego działania, należy zwrócić na nie uwagę za pierwszym razem.
Pielęgnowanie komórek jak wychowywanie dzieci
Komórki są naprawdę delikatne. Najlepiej sprawdzać go codziennie, aby zapobiec zjawiskom nietypowym, takim jak brak wody, dwutlenek węgla, awaria zasilania i niedostateczna temperatura w inkubatorze. Konieczne jest również rozwiązywanie tych wypadków na czas, aby uniknąć większego bólu spowodowanego powtarzającymi się eksperymentami. .
Dobre komórki należy zasiać w odpowiednim czasie
Komórki pasażuje się partiami, więc nawet jeśli jedna partia się nie powiedzie, pozostaje zapas. Może to nie być łatwe dla przeciętnej osoby, takiej jak ta ostatnia. Ale to jest lekcja mojej krwi. Kiedy komórki zostały skażone, cała armia została zniszczona. Żałuję wtedy, że nie chroniłem nasienia.
Każda komórka ma swoje własne cechy i powinna być traktowana inaczej.
Komórki są takie same jak ludzkie, a różne komórki mają różne cechy kulturowe. Bądź ostrożny w procesie uprawy. Różne linie komórkowe używają różnych pożywek i surowicy.
Na przykład komórki mięśni gładkich, które hoduję, są bardzo aktywne i lubią być żywe. Za 2-3 dni będzie duża populacja, a ja nie lubię zbytnio jeść ani pić. To naprawdę najlepsze dziecko do wychowania. Komórki śródbłonka i komórki mięśni gładkich mają podobne osobowości, ale są bardzo niehigieniczne i niechlujne. Jest w nich dużo komórek wydzielniczych, dlatego trzeba je często zmieniać i myć. Komórki RAW264.7 są również bardzo wesołe i bardzo jadalne. Konieczne jest ich częste karmienie. Ból głowy polega na tym, że komórki są łatwo aktywowane. To dobrze, że butelka i środowisko, w którym są hodowane, jest wolne od endotoksyn, ale trudno mi jako matce je zaspokoić.
Przygotowanie do pracy przed szkoleniem
W tym obsługa materiałów eksploatacyjnych, konfiguracja odczynników, testy sterylności itp.
Czyszczenie naczyń szklanych. W przypadku naczyń szklanych (butelka z komórkami, butelka zawierająca roztwór odżywczy, mała butelka penicyliny itp.) najpierw użyj proszku do prania do czyszczenia (zwróć uwagę na martwe rogi), a następnie spłucz. Moczyć w roztworze kwasu przez ponad 24 godziny, a następnie 10 razy spłukać czystą wodą, aby usunąć resztki roztworu kwasu. Butelki itp. energicznie wstrząsać podczas płukania. Następnie moczono w wodzie podwójnie destylowanej przez 24 godziny. Po wyschnięciu zawinąć i suszyć w temperaturze 160 stopni przez 2 godziny.
Konfiguracja odczynników. Jako ciecz do hodowli komórkowej można na ogół stosować więcej niż podwójnie destylowaną wodę. I zwróć uwagę na regulację wartości pH.
Badanie sterylności. Używaj głównie sterylizacji filtrowej: takiej jak trypsyna, antybiotyki, roztwór G-418, różne media, pirogronian sodu, glutamina itp. Niektóre można sterylizować w autoklawie: PBS, D-Hank's itp.
Odczynniki są przechowywane w porcjach
W tym roztwór odżywczy, pankreatyna, surowica itp.
Serum jest szczególnie ważne. Serum należy przechowywać w -20 stopniach. Jeśli nie można zużyć jednej butelki na raz, 40-50} ml można rozlać do sterylnych butelek traktowanych kwasem lub nawet przechowywać w butelkach z penicyliną. Generalnie surowica dostarczana przez producenta jest sterylna i nie wymaga sterylnej filtracji. Jeśli w surowicy znajduje się dużo zawiesiny, surowicę można dodać do pożywki i przefiltrować razem, a surowicy nie należy filtrować bezpośrednio. (Brak wpływu na hodowlę komórkową w normalnych warunkach)
Butelkowaną surowicę należy rozmrażać stopniowo: 4-stopniowa lodówka jest całkowicie rozpuszczona, a następnie podzielona na opakowania. Podczas procesu rozpuszczania należy go regularnie wstrząsać (uważać, aby nie powstały pęcherzyki powietrza) w celu ujednolicenia temperatury i składu oraz ograniczenia występowania opadów. Nie rozmrażaj bezpośrednio od -20 stopni do 37 stopni, ponieważ temperatura zmienia się zbyt mocno, co może łatwo spowodować koagulację i wytrącanie się białka.
Inaktywacja termiczna odnosi się do ogrzewania całkowicie rozmrożonej surowicy w temperaturze 56 stopni przez 30 minut. Gdy kąpiel wodna wzrośnie do 56 stopni, włóż serum, poczekaj, aż temperatura wzrośnie do 56 stopni i policz czas, generalnie wstrząsaj równomiernie raz na 5 minut. Celem tej obróbki cieplnej jest dezaktywacja składników dopełniacza w surowicy. O ile nie jest to konieczne, tej obróbki cieplnej na ogół nie wykonuje się, ponieważ spowoduje to znaczny wzrost osadu i wpłynie na jakość surowicy. Zwróć uwagę na wpływ zmiany surowicy (w tym różnych partii) na komórki.
Silne poczucie sterylności
Przed eksperymentem ultra-czystą ławkę sterylizowano promieniowaniem UV przez 30 minut, aseptyczną powierzchnię operacyjną przetarto 70% etanolem, a ultra-czystą ławkę wentylatora włączono na kilka minut przed rozpoczęciem operacji eksperymentalnej .
Aby dowiedzieć się więcej o laboratoryjnych hodowlach komórkowych, kliknij: http://www.shjasw.com/