Sposoby unikania kontaminacji komórek: wskazówki dotyczące pipetowania, które musisz znać
Wśród wielu zmiennych, które są kontrolowane w hodowli komórkowej, jedna specyficzna zmienna wpływa na cały eksperyment: zanieczyszczenie. Jednym z czynników przyczyniających się do zanieczyszczenia komórek nie zawsze jest na radarze i chociaż może on po cichu wpływać na zdrowie komórek i wpływać na dane pomiarowe, jest to zanieczyszczenie pipetą.
Podczas projektowania eksperymentów niewiele uwagi poświęca się wyborowi pipet, końcówek do pipet i programów do pipetowania. Nawet ogólne rozwiązanie (autoklawowanie) w celu uniknięcia zanieczyszczenia pipet może nie być tak skuteczne, jak się powszechnie uważa.
Pierwsza zasada kultury komórkowej: unikaj kontaminacji. Dlaczego sterylna technika jest tak ważna dla udanej hodowli komórkowej?
Technika aseptyczna to jedyny sposób na uzyskanie wiarygodnych i powtarzalnych wyników. Zanieczyszczenia mogą wpływać na wzrost komórek, metabolizm i zdrowie --, co jest przedmiotem zainteresowania naukowców. Zanieczyszczone linie komórkowe nie mają pożądanych właściwości i za każdym razem funkcjonują inaczej, w zależności od stopnia zanieczyszczenia. Ponadto, jeśli zanieczyszczenia zarosną twoje komórki będące przedmiotem zainteresowania, możesz skończyć badanie niewłaściwego organizmu.
Z jakimi rodzajami zanieczyszczeń często spotykają się naukowcy?
Powszechnymi źródłami zanieczyszczeń są bakterie, drożdże i pleśń. W hodowli komórkowej najtrudniejszą do wykrycia i wyeliminowania jest mykoplazma. Do mniej powszechnych rodzajów zanieczyszczeń należą na przykład wypłukiwane tworzywa sztuczne w laboratoryjnych materiałach eksploatacyjnych.
Jakie są najczęstsze przyczyny zanieczyszczenia komórek?
Częstym źródłem zanieczyszczenia jest niewłaściwe pipetowanie, na przykład stosowanie zanieczyszczonych pipet i końcówek bez filtra. Ponadto problemem jest brak dobrych praktyk laboratoryjnych, takich jak nieodpowiednia dekontaminacja instrumentów, takich jak inkubatory czy komory z przepływem laminarnym. Aby usunąć mykoplazmę, wymagana jest filtracja przy użyciu filtra 0,1 µm zamiast filtra 0,2 µm.
Trzy zanieczyszczenia pipet:
1. Zanieczyszczenie pipety do próbki: Pipeta lub końcówka pipety zanieczyszcza próbkę.
Jak ominąć:
Używaj sterylnych końcówek z filtrem, aby zapobiec zanieczyszczeniu korpusu pipety.
Zmieniaj końcówkę pipety po każdej próbce.
Regularnie autoklawuj lub sterylizuj pipety etanolem. Wybierz pipetę kompatybilną z autoklawem.
2. Zanieczyszczenie próbki do pipety: Pipetowanie próbki do korpusu pipety powoduje zanieczyszczenie pipety.
Jak ominąć:
Użyj końcówek z filtrem lub końcówek wyporowych, aby zapobiec przedostawaniu się próbek do korpusu pipety.
Podczas pipetowania trzymaj pipetę w pozycji pionowej. Przechowuj pipetę w pozycji pionowej.
Przechyl butelkę podczas pipetowania.
Zwolnij przycisk powoli, aby uniknąć rozpryskiwania próbki do pipety. Wybierz pipetę wyposażoną w funkcję miękkiego wyrzucania.
3. Zanieczyszczenie między próbkami: Resztki pipetowanych próbek są przenoszone do następnej próbki. Zwykle występuje, gdy ta sama końcówka jest używana wielokrotnie.
Jak ominąć:
Zmieniaj końcówkę pipety po każdej próbce.
Użyj końcówek z filtrem lub końcówek wyporowych, aby zapobiec przedostaniu się próbki do korpusu pipety i do następnej próbki.
Upewnij się, że końcówka pipety jest uszczelniona na pipecie, aby uniknąć wycieku próbki. Na przykład końcówka Yongyue Medical.
Czy istnieją czynniki skażenia, których naukowcy mogą nawet nie być świadomi?
Skuteczność autoklawowania często nie jest weryfikowana, a jeśli autoklaw nie działa prawidłowo, autoklawowane końcówki pipet mogą nie być sterylne. Wstępnie wysterylizowane filtry zapakowane w opakowanie ochronne to najbezpieczniejsza opcja zapobiegania takim wypadkom. Proces wstępnej sterylizacji wysokiej jakości końcówek do pipet jest regularnie weryfikowany w celu zapewnienia skuteczności wstępnej sterylizacji.
W jaki sposób narzędzia do pipetowania i dozowania ułatwiają naukowcom obchodzenie się z próbkami w sterylnym środowisku?
Wybór odpowiednich pipet i końcówek do pipet może ułatwić aseptyczny przepływ pracy. Pipety medyczne Yongyue są łatwe do czyszczenia i otwierania bez użycia narzędzi, co przyspiesza codzienne czyszczenie. Ponieważ autoklawowanie jest skuteczniejsze w usuwaniu zanieczyszczeń niż chusteczki nasączone etanolem, pipety mechaniczne Sartorius można w pełni autoklawować, co oznacza, że można je niezawodnie odkażać. Miękki wyrzut końcówki zapobiega potencjalnemu ryzyku rozpryskiwania się zanieczyszczeń podczas wyrzucania końcówki. Wstępnie wysterylizowane końcówki z filtrem chronią próbki przed zanieczyszczeniem krzyżowym. Końcówki medyczne Yongyue są również pakowane w szczelne opakowanie, co oznacza, że żadne zanieczyszczenia w warunkach przechowywania i dostawy nie będą miały kontaktu z końcówkami ani pudełkiem z końcówkami.
Jak naukowcy mogą uniknąć zanieczyszczenia? Jakie są Twoje najważniejsze wskazówki dotyczące sterylnej pracy?
Po pierwsze, dobra praktyka laboratoryjna i staranne planowanie etapów pracy. Upewnij się, że w komorze z przepływem laminarnym przechowujesz tylko to, co jest potrzebne do określonego przepływu pracy, i używaj jednej kultury komórkowej w tym samym czasie. Ponadto regularne testowanie zanieczyszczeń, takich jak mykoplazma, zapewnia spokój ducha i pewność wyników. Podczas pracy w sterylnych warunkach pieniądze wydane na wysterylizowane końcówki z filtrem i sterylne odczynniki są warte swojej ceny.
